Bạn đang xem: Flow cytometry là gì
FASC (Flourescent activated cell sorters) là các máy đếm tế bào theo loại chảycó công dụng phân loại những núm bào được đánh dấu huỳnh quang xuất phát từ một tất cả hổn hợp cácquần thể tế bào.Trước tiên, các phân tử sẽ được mang lại đèn Laser trong mộtloại chất lỏng. Bất kỳ hạt kết hợp hoặc tế bào làm sao bao gồm size trường đoản cú 0.2-150 µmnhững phù hợp; các tế bào trường đoản cú những mô rắn đề xuất được thải trừ trước khi so với.Lúc những phân tử đi qua tia laze, chúng tán xạ tia nắng laze, ánh sáng tán xạ và ánhsáng sủa huỳnh quang quẻ sẽ tiến hành thu tại thấu kính tại địa chỉ phù hợp. Sự kết hợp giữaphần tử bóc chùm tia cùng các kính lọc đang hướng tia nắng tán xạ với ánh nắng huỳnhquang đãng cho tới detector; ở đầu cuối các detector sẽ khởi tạo ra tín hiệu năng lượng điện tỉ lệ thuậncùng với biểu hiện quang quẻ học tập.
Cácyếu tố chính của sản phẩm flow cytometer (đếm tế bào theo chiếc chảy) với cellsorter (phân các loại tế bào) gồm những: hệ dung dịch, hệ thống quang đãng học (ánh sángkích ham mê và bộ thu ánh nắng kích thích), mạng lưới năng lượng điện (detector) và một máytính. Hệ thống hỗn hợp có trách nát nhiệm điều phối cái dung dịch cất những hạttới nguồn sáng. Hệ thống quang học tập kích say đắm đã tập trung nguồn sáng sủa tới các tếbào/ các hạt, còn khối hệ thống quang học thu nhận đang đưa những tia nắng tán xạ hoặcánh nắng huỳnh quang tới mạng lưới điện tử. Mạng lưới điện sẽ thấy tín hiệuvà đưa những biểu đạt thành những công bố số tỉ lệ thành phần thuận với độ mạnh ánh sángvới máy tính xách tay đang so sánh các báo cáo này.
Kỹthuật flow cytometry được áp dụng rộng rãi trong vô số nhiều ứng dụng nhằm vạc hiệnnhững kháng nguyên màng, tế bào chất với nhân. Hình như, toàn bộ tế bào với những thànhphần tế bào như bào quan tiền, nhân, DNA, RNA, lan truyền sắc thể, cytokines, hormone vàprotein rất có thể được vạc hiện tại trải qua nghệ thuật này. Việc so với những quátrình trong tế bào và quy trình tế bào dựa vào câu hỏi đo lượng calcium cùng điện thếmàng cũng là 1 trong những trong những áp dụng của flow cytometry. Bài viết sau đây sẽtrình bày kỹ hơn về những thành phần của một sản phẩm flow cytometry.
Hệthống dung dịch tất cả phương châm di chuyển những tế bào vào một dung dịch đi qua thiếtbị nhằm thu được những tài liệu, hệ thống này bao hàm 2 thành phần: sheath fluid (dòngdung dịch bảo vệ/ dòng hỗn hợp bên ngoài) và pressurized line (loại áp suất).Sheath fluid là 1 trong những hỗn hợp trộn loãng (thông thường là đệm PBS- phosphate-bufferedsaline), được tiêm vào buồng flow nằm ở vị trí trung tâm của thứ vị cái áp suất.Một áp suất bầu không khí cũng rất được tiêm vào các tế bào đã có được hòa tan vào ống mẫuvào bên trong phòng flow. Dòng mẫu sẽ tiến hành gửi vào lõi trung vai trung phong mà lại xung quanglà dòng hỗn hợp bảo đảm an toàn cùng biến đổi cái lõi (core fluid- một loại hết sức nhỏ nhắn chỉđể từng tế bào hoặc từng phân tử đi qua), được tạo nên dựa vào sự khác hoàn toàn áp suấtgiữa cái dung dịch bên ngoài (sheath fluid) với loại mẫu (sample fluid), từ bỏ đógóp triệu tập tế bào/phân tử có trong chủng loại thành cái tế bào đối chọi nhằm đi qua chùm tiatia laze. Do kia, quá trình này có thể chấp nhận được thắp sáng đồng đa số mỗi tế bào nên được gọilà quá trình triệu tập tbỏ động lực học tập (hydrodynamic focusing).
Xem thêm: Hire Là Gì Trong Tiếng Việt? Nghĩa Của Từ Hired Trong Tiếng Việt
Tỷlệ chuyển những tế bào vào chùm tia Laser có thể được triển khai nhờ vào hệ thống sản phẩm công nghệ flowcytometer dựa vào mục đích của so với. ví dụ như, tỉ lệ loại chảy cao thường xuyên sửdụng mang lại Việc giám sát và đo lường nhỏng immunophenotyping sinh hoạt tế bào động vật bao gồm vú, trong khiđó, tỉ lệ thành phần mẫu rã phải chăng hay thích hợp phù hợp với những áp dụng trải nghiệm độ phân giảicao nhỏng so sánh yếu tố DNA. Các thông số đặc biệt quan trọng chiếm được nhờsự tiếp xúc những hạt cùng với chùm tia Laser phụ thuộc vào vào vận động tối ưu của các hệthống hỗn hợp. Do đó, rất cần được đảm bảo an toàn rằng không tồn tại sạn bong bóng khí cùng các mảnhvụn vào khối hệ thống này để áp lực nặng nề đã đồng hồ hết ở hầu hết thời gian.
Hệthống quang đãng học trong vật dụng flow cytometry làm cho trách nhiệm chiếu ánh sáng kích thíchbao hàm đèn tia laze, thấu kính cùng thành phần thu ánh sáng. Thấu kính gồm phương châm địnhhình với triệu tập chùm tia tia laze. Ánh sáng laze được tạo thành bằng cách kích thíchnhững điện tử (electron) đang ngơi nghỉ trạng thái cơ phiên bản lên tâm lý kích ham mê có mứcnăng lượng cao nhờ vào năng lượng điện áp, sau đó 1 thời gian nthêm (hay là 10-7 –10-8 giây), các năng lượng điện tử đã trở về tâm trạng cơ bạn dạng và phạt ra nănglượng bên dưới dạng những photon ánh nắng. Sau lúc laze hấp thụ vào tế bào, phần đông ánhsáng bị chệch phía so với con đường tryền thẳng vì chưng gặp gỡ yêu cầu đồ dùng chống được hotline làánh nắng tán xạ. Có hai một số loại tia nắng tán xạ là forward scatter (FSC) với sidescatter (SSC). Các nguyên tố tác động tới việc tán xạ tia nắng là màng tế bào,nhân, các hạt của tế bào, hình dáng với mặt phẳng tế bào. Nhìn tầm thường kích thước củatế bào hoặc của một hạt và độ phức hợp phía bên trong tế bào được quánh hiệu bởi loạitán xạ. Ánh sáng sủa FSC là hiệu quả của sự việc nhiễu xạ nhận được dọc theo trục của chùmtia tới tia laze. FSC tỉ trọng với diện tích bề mặt hoặc kích cỡ tế bào với phù hợpnhằm phạt hiện nay, sáng tỏ các hạt về kích cỡ, thường áp dụng thịnh hành trongimmuophenotyping. Còn ánh sáng SSC bao hàm phần đông những ánh sáng khúc xạ cùng nhiễuxạ, được thu ở góc 90o so với chùm tia tới Laser. SSC tỉ lệ thành phần với thànhphần những hạt hoặc độ phức tạp bên phía trong tế bào. Ngoài ra, ánh sáng huỳnhquang quẻ bao gồm nguồn gốc trường đoản cú kháng thể hoặc dye lưu lại huỳnh quang quẻ như thể PI cũng đượcsự phản xạ tại cùng một góc với SSC.
Hình 2: Ánh sáng sủa tán xạ (lightscattering). FSC tỉ lệ với form size, trong khi đó SSC tỉ trọng cùng với các thành phầnvới độ tinh vi bên phía trong tế bào.
Cótương đối nhiều thông số kỹ thuật tia laze vào vật dụng flow cytometer dựa trên loại chất huỳnh quangđược kích thích. Đèn argon laze (một đèn Laser thông thường với bước sóng kíchmê thích 488 nm) được áp dụng nhằm kích thích nhiều dye tổng phù hợp nlỗi fluoresceinisothiocyanate (FITC) cùng dye huỳnh quang đãng tự nhiên nhỏng tảo và phytoplankton. Rấtnhiều máy flow cytometer cùng sorter gồm thêm đèn laze có khả năng kích mê thích chấthuỳnh quang nghỉ ngơi bước sóng kích yêu thích làm việc dải sóng UV (300-400nm) hoặc red diodekích yêu thích hóa học huỳnh quang làm việc dải sóng đỏ (630 nm).
Hệthống thu dấn tia nắng gồm thấu kính nhằm thu ánh nắng phát ra từ bỏ sự tương tácgiữa chùm tia Laser và hạt; một khối hệ thống gương cùng kính thanh lọc để tách và sau đó hướngánh sáng có bước sóng đặc hiệu cho detector tương thích.
